Fil-qasam tad-dijanjostika molekulari, ir-reazzjoni tal-katina tal-polimerażi (PCR) ilha titqies bħala l-istandard tad-deheb għall-iskoperta tal-aċidu nuklejku. F'dawn l-aħħar snin, it-teknoloġiji ta' amplifikazzjoni iżotermika, rappreżentati mill-amplifikazzjoni tal-polimerażi recombinase (RPA), kisbu attenzjoni dejjem akbar minħabba l-veloċità, is-sempliċità, u l-adegwatezza tagħhom għall-ittestjar fuq-post.
Għalkemm kemm PCR kif ukoll RPA huma metodi ta 'amplifikazzjoni ta' aċidu nuklejku, huma differenti b'mod sinifikanti fil-prinċipji tax-xogħol, ir-rekwiżiti tat-tagħmir u x-xenarji ta 'applikazzjoni, u jagħmlu kull teknoloġija adattata għal bżonnijiet dijanjostiċi differenti.
1. Prinċipji Ewlenin: Ċikliżmu Termali vs Amplifikazzjoni tat-Temperatura-Kostanti
Il-PCR huwa proċess bijokimiku li kapaċi jamplifika molekula waħda tad-DNA f'miljuni ta' kopji f'perjodu qasir ta' żmien. Ir-reazzjoni tiddependi fuq ċikli termali ripetuti u tikkonsisti fi tliet passi ewlenin:
1.Denaturazzjoni (90–95 grad) – DNA bi -stranded doppju huwa separat f'linji singolu.
2.Annealing (55–65 grad) – Primers jorbtu mas-sekwenzi fil-mira.
3.Esttensjoni (72 grad) - DNA polymerase tisintetizza linji tad-DNA ġodda.
Permezz ta' dawn iċ-ċikli ta'-temperatura kkontrollata, id-DNA fil-mira jiġi amplifikat b'mod esponenzjali bi preċiżjoni għolja. Madankollu, il-PCR teħtieġ strumenti kumplessi taċ-ċikli termali u tipikament tieħu 1-2 sigħat biex titlesta.
B'kuntrast, RPA topera f'temperatura kostanti ta '37-42 grad, li tippermetti amplifikazzjoni rapida ta' l-aċidu nuklejku mingħajr ċikliżmu termali. It-teknoloġija tiddependi fuq l-azzjoni kkoordinata ta' proteini recombinase, proteini li jorbtu fid-DNA-single stranded-, u DNA polymerase li tispjaċih bi strand-biex tinkiseb amplifikazzjoni ta' mira speċifika ħafna taħt kundizzjonijiet iżotermiċi.
Il-polimerażi tad-DNA użata fl-RPA għandha attività ta' spostament tal-linji iżda m'għandhiex attività ta' exonuclease 5'→3'. Matul l-amplifikazzjoni, il-primers ta 'barra jestendu tul il-linja tal-mudell. Meta jiltaqgħu ma' reġjuni doppji-sintetizzati minn primers ta' ġewwa, il-polimerażi ma tistax tiddegrada l-linja downstream u minflok tiċċaqlaqha, u tiġġenera prodotti ġodda ta' amplifikazzjoni.
Ir-reazzjoni kollha titlesta taħt temperatura kostanti, u b'hekk telimina l-ħtieġa għal strumentazzjoni kumplessa u tippermetti ttestjar ibbażat fuq il-punt{0}}tal--kura u l-qasam-veru. Billi tinkorpora reverse transcriptase, RPA jista 'jiġi applikat ukoll għall-iskoperta tal-mira tal-RNA.
Ir-riżultati tal-amplifikazzjoni jistgħu jiġu analizzati bl-użu ta' formati ta' qari multipli, inkluż skoperta ta' endpoint, monitoraġġ tal-fluworexxenza fil--ħin reali, analiżi tal-fluss laterali, u jistgħu jiġu integrati aktar ma' sistemi CRISPR-Cas, mikrofluwidi, jew sekwenzar tal--ġenerazzjoni li jmiss (NGS) għal żvilupp avvanzat tal-assaġġi.
Xenarji ta' Applikazzjoni: Preċiżjoni tal-Laboratorju vs.-Ittestjar Rapidu fuq is-Sit
Il-PCR saret waħda mit-teknoloġiji dijanjostiċi molekulari l-aktar siewja u tibqa 'l-istandard tad-deheb għall-ittestjar tal-aċidu nuklejku.
Grazzi għall-eżattezza għolja, l-ispiża-effettività, u l-iskalabbiltà, il-PCR tintuża ħafna fid-dijanjostika klinika, laboratorji ċentralizzati, istituzzjonijiet ta' riċerka, u programmi ta' skrining fuq-skala kbira, fejn l-infrastruttura u l-persunal imħarreġ huma faċilment disponibbli.
L-RPA, min-naħa l-oħra, joffri vantaġġi ċari f'dijanjostika rapida, fuq-sit. B'amplifikazzjoni kompluta f'inqas 20 minuta, rekwiżiti minimi ta 'tagħmir, u tħaddim sempliċi, RPA huwa idealment adattat għal.
- Kura tas-saħħa primarja u settings ta' emerġenza
- Spezzjoni doganali u fuq il-fruntieri
- Screening fuq il-post tal-mard tal-annimali u tal-pjanti
- Ittestjar ambjentali u tas-sikurezza tal-ikel
Meta kkombinat ma 'apparati portabbli u strippi tal-fluss laterali, RPA jippermetti ittestjar molekulari veloċi u affidabbli barra laboratorji tradizzjonali.
MIRA (Amplifikazzjoni Rapida Isotermika Multienżima)hija t-teknoloġija proprjetarja ta 'amplifikazzjoni iżotermika ta' Amp Future. Jappartjeni għall-istess familja teknika bħall-RPA u huwa ispirat minn mekkaniżmi naturali ta 'rikombinazzjoni u tiswija tad-DNA, li juża enzimi funzjonali multipli biex tinkiseb amplifikazzjoni rapida tal-aċidu nuklejku taħt temperatura kostanti.
MIRA timpjega sistema kkoordinata ta' ħames enzimi ewlenin, inklużi helicase, recombinase, proteina li torbot id-DNA -single stranded-, u DNA polymerase, biex tippermetti:
- Firxa wiesgħa tat-temperatura operattiva: 25 grad –45 grad
- Amplifikazzjoni rapida: jirriżulta fi żmien 20 minuta
- Sensittività u speċifiċità għolja
- Sikurezza mtejba u riskju ta 'kontaminazzjoni mnaqqas
MIRA hija teknoloġija ta' amplifikazzjoni ta' aċidu nuklejku ddisinjata speċifikament għal ttestjar reali fuq il--post-tal--kura.
Filwaqt li tibni fuq il-pjattaforma MIRA, Amp Future żviluppat portafoll komprensiv ta’ prodotti għal POCT molekulari rapidu, inkluż:
Aġent ta' Rilaxx ta' Aċidu Nuklejku Rapidu:
L-aċidu nuklejku amplifikabbli jinkiseb fi żmien 5 minuti f'temperatura tal-kamra; inibizzjoni baxxa, li tippermetti tagħbija sħiħa tal-kampjun sa 50 μL; it-trasport u l-ħażna tat-temperatura tal-kamra, l-ebda protezzjoni tad-dawl meħtieġa.
Reaġent għall-Amplifikazzjoni tal-Aċidu Nuklejku Iżotermali:
Amplifikazzjoni kompluta f'5-20 minuta, rapida u effiċjenti; diversi forom ta 'reaġenti (trab lajofilizzat, mikrosferi lajofilizzati, eċċ.); diversi metodi ta' preżentazzjoni tar-riżultati (elettroforeżi, fluworexxenza, strixxi tat-test).
Apparat li jinġarr minjaturizzat:
Ditekters iżotermiċi diġitali, għodda tal-ittestjar tal-but-, li jinżammu faċilment f'id waħda, mgħammra b'bank tal-enerġija, li jeħilsuk mir-restrizzjonijiet tal-laboratorju u jġib ittestjar preċiż tal-aċidu nuklejku fil-qasam.
Strixxi tat-Test Uniċi/Multipli:
Ottimizzat ibbażat fuq il-metodoloġija MIRA għal kompatibilità aħjar; flimkien mat-teknoloġija MIRA, li jenfasizzaw il-konvenjenza.
Analizzatur tal-Amplifikazzjoni tal-Aċidu Nuklejku kompletament Awtomatizzat:
Jeħtieġ operazzjoni waħda biss tat-tagħbija tal-kampjun għal skoperta kompletament awtomatizzata; limitu ta' skoperta sa kopja waħda; amplifikazzjoni iżotermika u capping awtomatiku jnaqqsu r-riskju ta 'kontaminazzjoni.
Fuq-Pakkett tal-Ittestjar Rapidu fis-Sit:
Ittestjar-fuq il-post-, f'kull ħin, kullimkien, kollu f'pakkett wieħed; itemm l-ittestjar fi 30 minuta, preċiż u sensittiv.
Għal aktar informazzjoni dwar il-prodott jew soluzzjonijiet, jekk jogħġbok tħossok liberu li tikkuntattjana.