Sejbien viżibbli u rapidu ta 'chaphamaparvovirus qtates bl-użu ta' amplifikazzjoni rapida isotermali b'ħafna enzimi u dipstick tal-fluss laterali
Ġurnal:Fruntieri fil-Mikrobijoloġija Ċellulari u ta' Infezzjoni
Fattur ta' Impatt:4.6
Chaphamaparvovirus felin(FeChPV)huwa parvovirus ġdid, misjub għall-ewwel darba fi qtates dijareaċi fil-Kanada fl-2019. Il-patoġeniċità u l-karatteristiċi molekulari tiegħu għadhom mhux ċari, u juri diversità ospitanti u ġenetika, li teħtieġ aktar investigazzjoni epidemjoloġika. Bħalissa, m'hemm l-ebda metodu standardizzat għall-iskoperta tal-FeChPV.
Il-metodu ta' dipstick tal-fluss laterali ta' amplifikazzjoni rapida iżotermika b'ħafna enzimi (MIRA-LFD)intuża b'suċċess għall-iskoperta ta 'viruses varji, li joffri vantaġġi bħall-ħeffa, is-sempliċità, u l-ebda ħtieġa għal strumenti ta' preċiżjoni. It-tim ta' riċerka stabbilixxa metodu MIRA-LFD adattat għal FeChPV biex jindirizza l-isfidi fl-iskoperta klinika tal-bażi. Mingħajr ma sserraħ fuq strumenti ta 'preċiżjoni,il-metodu MIRA-LFD temm is-sejbien ta' FeChPV f'37 grad fi żmien 20 minuta u ma wera l-ebda cross-reattività ma' viruses oħra. Il-limitu ta' skoperta kien 32.3 kopji/μL,10 darbiet ogħla mill-metodu PCR. Barra minn hekk, il-metodu MIRA-LFD skopra 29 kampjun FeChPV-pożittiv fost 417-il qattus dijarea, b'rata ta' pożittività kemmxejn ogħla minn dik tal-metodu tal-PCR nested. Dawn ir-riżultati jindikaw li l-metodu MIRA-LFD stabbilit għall-iskoperta tal-FeChPV huwa metodu effiċjenti, ekonomiku, affidabbli u sempliċi, li jikkontribwixxi għall-prevenzjoni u l-kontroll bikrija tal-infezzjoni tal-FeChPV.
1.Metodi Sperimentali
Kampjuni Kliniċi:Kampjuni ta’ swab tar-rektum użati f’dan l-istudju nġabru minn 632 qattus (inklużi 417 bid-dijarea u 115-il qattus b’saħħtu) u 474 kelb (inkluż 342 bid-dijarea u 132 kelb b’saħħithom) fi kliniċi veterinarji f’Guangdong, Henan, Anhui, provinċji ta’ Zhejiang u r-Reġjun Awtonomu ta’ Ġewwa u l-Mongolja22222222.
Amplifikazzjoni tal-Aċidu Nuklejku:L-aċidu nuklejku tad-DNA estratt ġie miżjud mas-sistema MIRA. Recombinase u primers iffurmaw kumpless; bl-għajnuna ta' proteini awżiljarji u proteini ta'-single stranded binding, huma invadew il-mudell tad-DNA ta' double-stranded. Primers marbuta ma' reġjuni komplementari omologi biex jiffurmaw reġjun D-loop, filwaqt li r-rekombinase żarmat mill-kumpless. Il-polimerażi marbuta mat-tarf 3' tal-primers u bdiet is-sintesi tad-DNA, b'mod esponenzjali amplifika r-reġjun fil-mira fuq il-mudell. Dan il-proċess ċikla malajr u b'mod effiċjenti, u b'hekk kiseb amplifikazzjoni ultra-veloċi tal-framment fil-mira fi 15-il minuta biss.
Żvilupp tal-Kulur tal-Istrixxa tat-Test:Il-prodott ta 'amplifikazzjoni ta' l-aċidu nuklejku ġie dilwit 1:10, applikat fuq l-istrixxa tat-test, u r-riżultati inqraw wara 5 minuti.
Il-proċess kollu mill-amplifikazzjoni tal-aċidu nuklejku sal-iżvilupp tal-kulur tal-istrixxa tat-test ħa biss 20 minuta.
Amp-prodotti Bijoloġiċi futuri ntużaw fl-esperiment:
Fl-istudju, ġew skrinjati erba' settijiet iddisinjati ta' kombinazzjonijiet speċifiċi ta' sondi primer-. Kemm l-elettroforeżi tal-ġel tal-agarose kif ukoll l-istrixxi tat-test tal-aċidu nuklejku intużaw għall-preżentazzjoni tar-riżultati. L-erba' kombinazzjonijiet ta' sondi primer-kollha jistgħu jiskopru l-virus FeChPV. Skont ir-riżultati tal-elettroforesi tal-ġel tal-agarose, il-kombinazzjoni FeChPV-4 wriet il-faxxa fil-mira l-aktar brillanti, għalhekk din il-kombinazzjoni ġiet magħżula għall-ittestjar sussegwenti.
Skont ir-riżultati tal-elettroforesi tal-ġel tal-agarose, l-amplifikazzjoni għal 5, 10, 15, u 20 minuta kollha taw il-faxxa fil-mira. L-intensità tal-faxxa fil-mira laħqet il-quċċata fi 15-il minuta ta 'amplifikazzjoni, u stabbilixxiet 15-il minuta bħala l-aħjar ħin ta' reazzjoni għal dan l-assaġġ. L-amplifikazzjoni f'36 grad, 37 grad, 38 grad, 39 grad, u 40 grad kollha pproduċew il-faxxa fil-mira, bil-faxxa l-aktar brillanti osservata f'39 grad, li tistabbilixxi 39 grad bħala l-aħjar temperatura ta 'reazzjoni għal dan l-assaġġ.
(Figura A: 1: Amplifikazzjoni 5min; 2: Amplifikazzjoni 10min; 3: Amplifikazzjoni 15min; 4: Amplifikazzjoni 20min) (Figura B: 1: Amplifikazzjoni 36 grad; 2: Amplifikazzjoni 37 grad; 3: Amplifikazzjoni 38 grad; 4: Amplifikazzjoni 39:grad; 39:grad Amplifikazzjoni; )
2.Prestazzjoni ta 'Sejbien
Sensittività:
(Figura A: Ir-riżultati tal-MIRA ippreżentati bl-użu tal-elettroforeżi tal-ġel tal-agarose)
(Figura B: Riżultati tal-PCR nested ippreżentati bl-użu tal-elettroforesi tal-ġel tal-agarose)
(Figura C: Riżultati MIRA ippreżentati bl-użu ta 'strixxi tat-test tal-aċidu nuklejku)
Il-kampjuni ġew soġġetti għal dilwizzjonijiet serjali ta '10 darbiet li jibdew minn 3.23 × 10⁶ kopji / μL. PCR nested b'elettroforesi tal-ġel tal-agarose jista 'jiskopri b'mod stabbli 3.23 × 10² kopji/μL; MIRA b'elettroforeżi tal-ġel tal-agarose u MIRA bi strixxi tat-test tal-aċidu nuklejku setgħu t-tnejn jiskopru b'mod stabbli 3.23 × 10¹ kopji/μL.
Il-metodu MIRA wera sensittività konsistenti bl-użu ta 'żewġ formati ta' preżentazzjoni tar-riżultati differenti, u s-sensittività tal-metodu MIRA kienet superjuri għal dik tal-PCR nested.
Speċifiċità:
(1: FeChPV, chaphamaparvovirus tal-qtates; 2: FPV, virus tal-panlewkopenja tal-qtates; 3: FeAstV, astrovirus tal-qtates; 4: FBoV, bocavirus tal-qtates; 5: CachaV, chaparvovirus tal-klieb; 6: kontroll negattiv)
Il-metodu MIRA-LFD li għadu kif ġie stabbilit skopra FeChPV biss u ma wera l-ebda cross-reattività ma' viruses ta' referenza oħra, li jindika speċifiċità tajba.
3.Sommarju tal-Istudju
Dan l-istudju stabbilixxa metodu MIRA-LFD għad-detezzjoni tal-FeChPV mingħajr il-ħtieġa ta' strumenti ta'-preċiżjoni għolja. Bħala metodu ta 'skoperta effiċjenti, ekonomiku u affidabbli b'sensittività u speċifiċità għolja, il-metodu MIRA-LFD huwa aktar adattat għall-iskoperta klinika, u jipprovdi appoġġ tekniku għall-prevenzjoni u l-kontroll bikrija tal-infezzjoni FeChPV.
4.AMP-BIOTECH FUTUR
L-amplifikazzjoni rapida tal-aċidu nuklejku iżotermali multienżimi MIRA hija teknoloġija li tassew tippermetti skoperta rapida fuq-post.
It-teknoloġija MIRA hija bbażata fuq il-mekkaniżmu ta 'tiswija ta' rikombinazzjoni tal-ġeni in vivo, billi tiddependi fuq l-azzjoni sinerġistika ta 'proteini funzjonali multipli f'temperatura tal-kamra biex tinkiseb amplifikazzjoni rapida (5-20 min), sensittiva, speċifika u sigura ta' aċidu nuklejku f'temperatura ambjentali (25 grad -45 grad). Minħabba n-natura iżotermali tat-teknoloġija MIRA, għandha rekwiżiti ta 'tagħmir baxxi u tħaddim sempliċi. Permezz ta' tagħmir portabbli minjaturizzat, jista' jiġi applikat fl-ittestjar ta' quddiem f'diversi xenarji ta' applikazzjoni, li jġib ittestjar rapidu u preċiż tal-aċidu nuklejku f'settings bħal POCT, ittestjar fid-dar, għelieqi agrikoli, u infurzar tal-liġi-post. Ibbażat fuq it-teknoloġija MIRA, Amp-future Biotech żviluppat serje ta' prodotti ta' ttestjar rapidu-post, inklużi aġenti ta' rilaxx rapidu ta' aċidu nuklejku, reaġenti ta' amplifikazzjoni ta' aċidu nuklejku rapidu iżotermali, strixxi tat-test tad-deheb kollojdali, u tagħmir portabbli minjaturizzat, u ħolqu soluzzjoni ġenerali għall-ittestjar molekulari rapidu fuq{{11}post. Barra minn hekk, it-teknoloġija MIRA ta 'Amp-future toffri vantaġġi ta' applikazzjoni meta kkombinata mat-teknoloġija CRISPR, NGS, SNP, mikrofluwidi, u aktar.
Minbarra s-serje ta' prodotti ta' ttestjar rapidu fuq-sit murija hawn fuq, Amp-future Biotech tipprovdi wkoll:
Reaġenti tar-Riċerka:Jipprovdu materja prima reaġent u appoġġ tekniku għar-riċerka xjentifika bażika, kif ukoll referenzi tal-letteratura tal-proġett.
Produzzjoni OEM:Kapaċi jipproduċu b'mod indipendenti prodotti lesti ta'-purità għolja,-attività għolja matul il-proċess kollu, u jiksbu produzzjoni fuq skala-industrijali.
Żvilupp ikkummissjonat tal-proġett:Informazzjoni tas-sekwenza u riżultati tal-analiżi tal-allinjament tas-sekwenza, disinn u sinteżi tas-sonda tal-prinċipal tal-proġett-, sintesi u kampjuni tal-plasmid tal-proġett, rapporti u riżultati tal-proġett, eċċ.
Għal aktar informazzjoni, merħba li tinvestiga.