Biex tinkiseb amplifikazzjoni tas-sinjali għal traċċi ta 'aċidi nuklejċi virali u nipprovdu sottostrati suffiċjenti għal Cas14a, żviluppajna aMIRA (amplifikazzjoni rapida isotermali multienżima asimmetrika) ibbażata fuq MIRA. Is-sistema aMIRA-Cas14a li tirriżulta toffri l-vantaġġi ewlenin li ġejjin:
1. L-istojkjometrija tal-primer ottimizzata tippermetti lil MIRA tipproduċi ssDNA b'mod preferenzjali żejjed, li jservi bħala s-sottostrat dirett għal Cas14a. Billi taġġusta l-proporzjon ta' primer-għal-reverse għal 20:1, is-sistema tiġġenera ssDNA biżżejjed biex tattiva l-attività ta' qsim indipendenti PAM- ta' Cas14a, li speċifikament jagħraf u jaqsam l-ssDNA.
2. L-integrazzjoni f'pot wieħed ta' MIRA u CRISPR-Cas14a telimina r-riskji ta' kontaminazzjoni inkroċjata.
3. MIRA ttejjeb b'mod sinifikanti s-sensittività ta' skoperta, u tippermetti s-sejbien ta' aċidi nukleiċi virali b'abbundanza ultra-baxxa.
4. aMIRA-Cas14a żżomm speċifiċità għolja, tevita pożittivi foloz ikkawżati minn amplifikazzjoni mhux speċifika.
Fl-aħħar mill-aħħar, l-integrazzjoni one-pot ta' MIRA u CRISPR-Cas14a telimina r-riskji ta' kontaminazzjoni u tikseb sinerġija perfetta bejn is-saħħiet ta' MIRA u s-sistema CRISPR-Cas14a. Dan isolvi l-isfida tal-industrija kollha tal-inkompatibbiltà bejn l-amplifikazzjoni iżotermika u s-sistemi CRISPR, li jirrappreżentaw l-avvanz teknoloġiku ewlieni tal-pjattaforma MaC14a. Is-sistema aMIRA-Cas14a tikseb titjib ta' 1,000 darba fis-sensittività filwaqt li tiżgura amplifikazzjoni speċifika. Flimkien mar-rikonoxximent speċifiku għas-sekwenza ta' Cas14a, dan jipprovdi validazzjoni ta' speċifiċità b'saff doppju, mingħajr reattività inkroċjata kontra viruses mhux fil-mira jew kampjuni b'saħħithom-li jindirizzaw punt ieħor ta' uġigħ fl-industrija: it-tendenza għal pożittivi foloz.
Ir-reaġenti ta 'amplifikazzjoni rapida isotermali multienżima MIRA użati f'dan l-istudju ġew ipprovduti minn Amp-Future (Changzhou) Biotech Co., Ltd. Lil hinn mill-prestazzjoni eċċellenti tar-reaġent, Amp-future Biotech toffri wkoll tim ta' appoġġ tekniku professjonali u li jirreaġixxi malajr.
MIRA turi kompatibilità qawwija ma' ċipep mikrofluwidi bbażati fuq ċentrifuga-żviluppati għar-riċerka u applikazzjonijiet dijanjostiċi:
1.Sistema ta 'reazzjoni minjaturizzata, adattata għall-kmamar ta' reazzjoni tal-mikro-volum karatteristiċi taċ-ċipep mikrofluwidi;
2.Kapaċità ta 'skoperta multiplex f'ġirja waħda;
3.Kompatibbiltà ma 'apparati portabbli, flussi tax-xogħol bla xkiel minn kampjun għal riżultat.
għamilna apparat portabbli integrat ta' "kampjun-in, answer-out" point-of-care testing (POCT) ottimizzat għall-iskjerament fuq il-post, kif muri fil-Fig. 4A. Il-prototip kompatt (23 cm (L) × 21 cm (W) × 14 cm (H), 12.5 kg massa totali) jikseb portabbiltà eċċezzjonali. Il-komponenti ewlenin tas-sistema jinkludu mutur servo ta'-preċiżjoni għolja għal kontroll rotazzjonali preċiż u unità tat-tisħin tal-arja għar-regolazzjoni tat-temperatura. Modulu integrat ta 'skoperta ottika, pożizzjonat taħt iċ-ċippa, jiffaċilita l-eċitazzjoni u l-kejl tal-fluworexxenza, u jiżgura sensittività għolja u preċiżjoni fl-iskoperta. L-apparat portabbli huwa mgħammar b'sistema operattiva Android inkorporata, li toffri interface faċli għall-utent fejn l-operaturi jistgħu jagħżlu fajls ta' tħaddim ipprogrammati minn qabel li fihom parametri dettaljati bħall-ħin tar-reazzjoni u t-temperatura. Ir-riżultati u l-konklużjonijiet jintwerew f'-ħin reali fuq skrin LCD, li jippermetti akkwist rapidu ta' informazzjoni. Barra minn hekk, is-sistema tinkorpora modulu ta' komunikazzjoni mingħajr fili li jappoġġja t-trażmissjoni ta' data-ħin reali għal apparat mobbli jew servers tas-sħab, li jintegra ma' algoritmi ta' intelliġenza artifiċjali għal interpretazzjoni u analiżi immedjati tar-riżultati tat-test.
